大肠杆菌有多大（质粒提取的注意事项）

大肠杆菌有多大？

质粒的大小一般在10kb左右，但是F因子要大很多。

是一个约100kb的质粒。

它编码60多种参与复制、分配和接合过程的蛋白质（WillettsandSkurray，1987）。

虽然F因子通常以双链闭环DNA（1-2个拷贝/细胞）的形式存在，但它可以在大肠杆菌染色体中至少30个位点处进行随机整合（Low，1987）。

携带F因子的细胞，或以游离状态或以整合状态表达三根发样状的F菌毛。

F菌毛为供体与受体细胞之间产生性接触所必需。

质粒提取的注意事项？

1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。

2、RNA的去除，首先是使用RNase消化。

在溶液I中加入高浓度的RNaseA(100ug/ml)，或者用含25ugRNaseA/mlTE溶解抽提好的质粒，都可以降低RNA残留，但都不能彻底去除。

3、蛋白质的去除，主要是靠不溶解的K-SDS-蛋白质复合物的形成。

虽然将中和后的体系置于4C一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。

首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。

目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取，可以根据实验的不同需求，选择相应的试剂盒。

质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，获得的质粒可以用于常规的载体构建，一般适用于5ml以下菌液。

而质粒中提，在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素，获得的质粒可以用于细胞转染，常规需要菌液量为10-15ml。

质粒大提与中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。

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