什么是紫外可见分光光度法 紫外分光光度计的使用原理和方法

什么是紫外可见分光光度法？

紫外--可见分光光度法：

是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。

操作简单、准确度高、重现性好。

波长长（频率小）的光线能量小，波长短（频率大）的光线能量大。

分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。

紫外分光光度计的使用原理和方法？

工作原理如下：

由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，根据这一特性，可对物质进行定性分析。

使用方法：

将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。

若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。

如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。

这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。

实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。

常见紫外分光光度计该如何使用？

使用前仪器要调零、调百校准，参比溶液又称空白溶液。

测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。

通常，用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。

有时，基体中虽不含被测物质，但含有别的物质，这时必须保证其不影响测试。

经常碰到的是试剂空白中含有被测物质，此时必须经过纯化将其除去。

否则将影响测定结果。

在色谱分析中，有时基体中可能存在一个以上的和被测组分相距较远的色谱峰，计算机在数据处理中不会计入它们，不影响测定。

以所含铁离子是多少为例：

参比溶液与测量溶液就相差铁离子含量，在测量之前要用不含铁离子的参比溶液扫描，调整仪器后（调100的过程），然后再测量含铁离子溶液的比色皿，这样测量溶液中的铁离子会形成自己特定的峰值，次峰值与数据库里基准峰值对比就可以得出溶液所含量了。

如果数据库中没有铁离子的曲线，你还要自己先用不同铁离子浓度的溶液做工作曲线，然后进行测量。

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